MDC检测方法

一、主要试剂材料

细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)（Solarbio，G0170）

DMEM（Hyclone，SH30023）

FBS（Hyclone，SH30070.03）

青链霉素（Hyclone，SV30010）

胰酶（Hyclone，SH30042.01）

PBS（南京生兴，SN331）

CO₂培养箱（Thermo fisher，3131）

Confocal荧光显微镜（Zeiss，LSM710）

二、实验方案

1、MG63及其耐药株培养在含10%胎牛血清的DMEM完全培养基中培养，培养在37℃含5%CO₂的细胞培养箱中培养，当细胞增殖至80%-90%时，用胰酶将细胞消化下来，按照1:3比例传代。

2、将1×10⁶个细胞种在3.5cm玻璃底培养皿中，将细胞放入培养箱中培养过夜后，分别加入miR-22、cisplatin、cisplatin和miR-22后，将细胞放入培养箱中培养12h、24h。

3、将细胞从培养箱中取出，去除培养基，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。

4、加入适量MDC Stain，轻轻混匀。

5、室温避光染色15～45min。

6、用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。

7、加入100μl的Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。

8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，拍照。